甲基化检测样本前处理试剂盒
¥698.00
CWY122M
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DNA经亚硫酸氢盐处理后，可使未甲基化的胞嘧啶转变为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变，进而实现甲基化碱基的识别。本试剂盒将DNA变性和亚硫酸氢盐转化过程整合为一步，极大缩短了转化时间而不影响转化效率，转化效率可达到99.5%以上。
本试剂盒通过结合纯化柱，从亚硫酸氢盐修饰的溶液中回收DNA，回收的DNA纯度高，完整性好，可直接用于测序、甲基化PCR等下游实验。
▪ 转化速度快：转化反应仅需70 min。
▪ 转化回收效率高：未甲基化的胞嘧啶转化效率≥ 99.5%，回收率＞80%。
▪ 投入量范围广：支持100 pg~2 μg范围DNA投入量。
▪ 样本兼容范围广：支持粪便、血液、组织、体液等提取纯化后的DNA、cfDNA为起始样本。
1. 转化效率高
【实验1】以293细胞gDNA掺入1% Unmethylated Lambda DNA为模板，投入量分别为2 ng、10 ng、100 ng和500 ng，分别使用w66国际·利来CWY122以及行业标杆A公司的试剂盒进行亚硫酸氢盐处理及纯化，得到的核酸利用λ DNA甲基化特异性引物进行扩增，扩增产物依次进行AGE鉴定、胶回收、NGS建库及分析。
图1：甲基化转化试剂盒的转化效率对比结果
实验结果表明：w66国际·利来的甲基化检测样本前处理试剂盒胞嘧啶转化为尿嘧啶的效率在99.5%以上。
2. 回收率高
【实验2】以人甲基化DNA标准品为模板，分别使用w66国际·利来CWY122和行业标杆A公司的试剂盒进行亚硫酸氢盐处理及纯化，得到的核酸使用Nanodrop定量分析。
图2：甲基化转化试剂盒的回收率对比结果
实验结果表明：w66国际·利来的甲基化检测样本前处理试剂盒的回收率总体在80%以上，明显优于A公司。同时回收率会因样本类型、样本DNA片段大小、样本投入量以及样本质量而有所差异。
| 保存条件 | 运输条件 |
|---|---|
| 吸附柱DF 2-8℃保存，其余组分15-30℃保存 | 吸附柱冰袋运输，其余组分室温运输 |
水、TE 或改良的 TE 缓冲液可用于溶解 DNA，并且不会干扰转化过程。
甲基化转化过程中，转化时间过久会引起甲基化的C部分变成U，导致假阴性，请严格按照操作说明书进行操作。
对基因组DNA进行亚硫酸氢盐处理后，因为非甲基化的胞嘧啶残基转化为尿嘧啶，所以原始碱基配对不再存在，回收的DNA通常富含A、U和T，并且在室温下为单链，具有有限的非特异性碱基配对。260 nm处的吸收系数与RNA的吸收系数相似。当纯化后的基因组DNA OD260为1时，相当于约40 μg/mL的核酸浓度。
基于处理后核酸状态的特殊性，其OD230会出现异常现象，可能导致OD260/OD230比值不稳定，实验表明这种情况不影响后续的PCR反应。OD260/OD280比值应为1.7-1.9。如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。
（1）对转化产物的定量方式选择错误：转化产物以单链形式存在，应使用ssDNA定量方式。
（2）Input DNA有杂质：确保DNA的A260/A280比值在1.8 - 2.0之间；
（3）漂洗缓冲液乙醇含量不足：请加入试剂瓶标签上指定体积的无水乙醇，勿长时间开盖放置；
（4）缓冲液DB中有机溶剂含量不足：请勿长时间开盖放置；
（1）转化液失效：转化液对光敏感，应避光保存，避免暴露在光线下；
（2）反应温度或时间设置错误：请按照说明书正确设置反应温度与时间；
（3）Input DNA样本GC投入量过高：应根据样本特殊性适当减少投入量。
亚硫酸氢盐修饰后的DNA建议立即检测，否则请于-20℃以下保存，保存时间不超过1个月，长期保存需置于-70℃或以下，并应避免反复冻融。
使用磁珠BQ前，一定要混匀，磁珠BQ沉降速度较快，多个样本的加入磁珠的时候中间一定要经过几次摇匀，推荐先加缓冲液CL及转化后产物，最后再加磁珠BQ，以免磁珠沉降。
正常现象，不影响试剂效果。
