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若TRIzon Reagent中出现沉淀，可将其置于56℃水浴中加热几分钟，沉淀即可溶解，不影响使用

离心后溶液不分层，主要可能由以下原因导致：

1. 混合不充分：加入TRIzon Pal^TM后，需剧烈振荡至少15秒，以确保充分混合，此为分相的关键前提。

2. TRIzon Pal^TM比例错误：请务必确认TRIzon Pal^TM添加量准确无误。标准比例为每使用1 mL TRIzon试剂需加入0.2 mL TRIzon Pal^TM。

3. 样品过载或过于粘稠：当处理蛋白、多糖或脂肪含量高的特殊样本时，裂解液会异常粘稠，阻碍分相。可在加入氯仿前，先将匀浆液于 4℃、12,000 rpm 离心10分钟，弃除沉淀，取上清进行后续操作。

若已发生不分层情况，可尝试以下补救措施：

1. 再次混合与离心：在确认TRIzon Pal^TM已按比例添加的前提下，将反应液再次剧烈振荡，并于 4℃、12,000 rpm 条件下重新离心。

2. 追加TRIzon Pal^TM：若高度怀疑TRIzon Pal^TM添加量不足，可谨慎地补加少量TRIzon Pal^TM，随后充分振荡并离心。

 可能的原因包括：

1. 样品降解：提取的样品应避免反复冻融。

2. 样本量过大：样品体积不应超过TRIzon体积的10% 。

3. 裂解不充分：加入TRIzon后需反复吹打使样本充分裂解 。

4. 洗脱体积过小：RNase-Free Wate体积不应小于30 μL，体积过小影响回收率。5. Buffer RW2未按试剂瓶标签加入相应体积的无水乙醇：Buffer RW2第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer RW2中加入无水乙醇。

1. 使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。

2. 玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。

3. 配制溶液应使用无RNase的水。

4. 操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。

1. 建议减少样本起始投入量。

2. 对于复杂样本如肌肉、脂肪组织等，可在匀浆后先进行离心（4℃, 12,000 rpm, 10分钟）以除去不溶物质，包括高分子量DNA。

3. 吸取水相时需小心，可适当保留，切勿吸到中间层和下层，避免基因组污染。

4. 加入TRIzon Pal^TM后，需在4℃下离心。

A260/A280比值低可能的原因及解决方案如下：

1. 水相吸取时被酚或蛋白污染。解决方案：吸取水相时需小心，可适当保留，切勿吸到中间层和下层，避免基因组污染。

2. 样品裂解或匀浆不充分。解决方案：可以适当增加TRIzom Reagent或者降低组织投入量进行提取。

取52 μL的RNase-Free Water，向其中加入8 μL的 10×Reaction Buffer和20 μL的 DNase I（1 U/μL），混匀， 配制成终体积为80 μL的反应液。

可以。TRIzon Reagent和TRIzon Pal™的货号分别为CW0580S和CW3166M。

说明书建议洗脱体积为30-50 μL，若样本RNA含量低，可适当降低洗脱体积但不少于30 μL。