AllPure DNA/RNA/Protein Kit
DNA/RNA/Protein 提取试剂盒
¥798.00 ¥1498.00
CW0591S
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| 保存条件 | 运输条件 |
|---|---|
| RT（15-30℃） | 常温 |
1. 样品降解或核酸含量低：样品反复冻融或保存不当易导致核酸降解。应使用新鲜样品或正确保存的样品，实验前注意评估样品状态。
2. 样品裂解不充分：组织或细胞未彻底匀浆会导致核酸释放不全。加入 Buffer RL 后须充分吹打或研磨，确保样本充分裂解。
3. 未加β-巯基乙醇：Buffer RL 中漏加β-巯基乙醇会严重影响裂解效率。Buffer RL使用前必须按每1 mL Buffer RL 加10 μL的比例添加β-巯基乙醇并混匀。
4. 样本量过多：样本量超过试剂盒允许范围易导致提取效率下降。应严格遵守说明书样本量要求（如组织≤30 mg，细胞≤107）。
5. 培养液有残留：残留培养液会稀释裂解液并引入杂质。加 Buffer RL 前须彻底清除培养液。
6. 乙醇未彻底晾干：吸附柱中残留乙醇会抑制核酸洗脱。漂洗完成后应室温开盖放置数分钟以彻底晾干吸附柱中残留的乙醇。
7. 漂洗缓冲液未加污水乙醇。 Buffer RW2/GW1/GW2未加无水乙醇漂洗时会洗脱膜上核酸，造成严重损失。 使用前务必按试剂瓶标签加入指定量的无水乙醇，混匀后使用。
8. 洗脱方法不正确：洗脱液量不足、未滴加在膜中央或静置时间不够会导致洗脱不全。RNA 洗脱液应≥30 μL，DNA 应≥100 μL，滴加于膜中心，静置至少2分钟（RNA）或5分钟（DNA）再离心。可回收首次洗脱液重新过柱以提高得率。
乙醇洗涤后产生的蛋白沉淀可能松散附着在管底，吸取上清时若操作不慎极易将其吸走或打散，导致蛋白丢失。解决方法： 弃上清时应格外小心。建议先缓慢倾倒出大部分乙醇，残留液滴用微量移液器从液面下方轻轻吸除，注意观察并避开管底沉淀。
1. 使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
2. 玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。
3. 配制溶液应使用无RNase的水。
4. 操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
1. 初始裂解液上柱离心时，样本量过大或裂解液过于粘稠，导致RNA未能有效穿过DNA吸附柱。解决办法：严格遵循推荐样本量。对于核酸含量高的样品（如脾脏、胸腺），可适当减少样本起始量。
2. 在步骤2中，离心力或离心时间不足，导致RNA未能完全穿过DNA吸附柱。解决办法：确保吸附柱上没有液体残留，如果有必要可以重复离心，直至所有的液体通过吸附柱的膜。
3. 实验操作中存在交叉污染。在操作多个样品时，枪头、收集管等耗材的重复使用或飞溅，可能导致RNA产物意外污染DNA洗脱管或DNA吸附柱。解决方法： 勤换枪头，并注意操作手法，避免不同样品间或不同步骤间的交叉污染。
1.样品量过多。裂解体系中的DNA总量可能会超过Spin Columns DM的载量，导致部分DNA污染RNA产物。解决方法： 严格遵循说明书推荐的样品量上限。
2.样品为基因组DNA含量极高的组织。对于基因组DNA含量极高的组织（如胸腺），部分DNA可能会穿透Spin Columns DM吸附柱。解决办法：可在Spin Columns RM柱上进行DNase I消化。
不建议。采用Buffer PLS溶解得到的蛋白样品适用于SDS-PAGE和Western Blot检测，但不适用于Bradford方法进行蛋白定量，如需采用Bradford方法进行蛋白定量可采用5% SDS溶解蛋白，或根据下游试验选择合适的蛋白溶解缓冲液。
在步骤17中，只需室温晾干几分钟将残余的乙醇充分挥发即可，过度干燥会使蛋白沉淀难于溶解。
