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  • Blood Genomic DNA Midi Kit (1-5ml)

    血液基因组柱式中量提取试剂盒(1-5 ml)

    ¥498.00 ¥598.00

    CW0541S

    50 preps

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    • FAQs
    本试剂盒适用于从新鲜或冷冻全血(用柠檬酸盐、EDTA或肝素等抗凝剂处理过的血液样品)、血浆、血清、血沉棕黄层、骨髓、无细胞体液等样本中提取总DNA,包括基因组DNA,线粒体DNA及病毒DNA。本品可以处理1-5 ml的全血,可纯化获得大小为100 bp到50 kb的DNA,纯化的DNA产量高、质量好,最大限度去除蛋白、色素、脂类及其他抑制性杂质,可直接用于PCR、荧光定量PCR、酶切和Southern Blot等实验。
    保存条件 运输条件
    Buffer RCL 2-8℃, 其他组分室温(15-30℃) 常温
    Q1:吸附柱堵塞该如何解决?
    A1:

    (1)裂解不完全:适当延长步骤6孵育时间,在孵育期间增加颠倒混匀次数;

    2)样品量太多:调整样品投入量,并按照不同体积对应提取方案提取。

    Q2:能否用水洗脱DNA?
    A2:

    若下游实验对pH值或EDTA敏感,可采用灭菌水作为洗脱液。使用前需调节水的pH值至7.0-8.5(可用NaOH调节),pH值低于7.0会显著降低洗脱效率。如需长期保存洗脱产物,推荐使用Buffer GE洗脱,并于-20℃保存。

    Q3:使用CW0541S提取的DNA出现RNA污染该如何解决?
    A3:

    完成步骤3后,可向其中加入4 μL RNase A100mg/mL)溶液,震荡15 秒,室温放置5分钟。RNase A本试剂盒并未提供,如需要可单独向本公司订购,货号:CW0601S

    Q4:是否可以将Proteinase K和Buffer GL预混?
    A4:

    不可以。

    Q5:提取的 DNA 纯度低的原因及该解决办法?
    A5:

    1. A260/A280比值低(<1.7)。原因:蛋白、血红素或乙醇残留导致污染。解决方法:

    1) 确保裂解充分:使用前请检查Buffer GL是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀,请将Buffer GL于56℃水浴孵育重新溶解。

    2) 彻底洗涤:对难处理的血液样本(如小鼠、猴子),重复Buffer GW1洗涤步骤,以彻底去除血红素。 

    3) 去除乙醇残留:吸附柱空离2分钟后将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。

    2. A260/A280比值高(>2.0)。原因:RNA残留或核酸降解。

    解决方法:

    1) 完成步骤3后,可向其中加入4 μL RNase A(100 mg/mL)溶液,震荡15 秒,室温放置5 分钟。RNase A本试剂盒并未提供,如需要可单独向本公司订购,货号:CW0601S。

    2) 避免降解:使用新鲜样本,避免样本反复冻融。

    3) 优化洗脱:改用Buffer GE洗脱,减少小片段核酸干扰。

    Q6:DNA产量低的解决办法?
    A6:

    (1)应尽可能选择新鲜的样本;

    (2)样本起始投入量不要超过所用方法的起始量标准;

    (3)样品保存时要尽可能的避免反复冻融;

    (4)样本应进行充分裂解:样品与Buffer GL及Proteinase K混匀不充分,重新提取血液样品并振荡使样品与Buffer GL及Proteinase K及时充分混匀,适当延长孵育时间,在孵育期间增加颠倒混匀次数;

    (5)Buffer GW1和Buffer GW2中无水乙醇添加量不准确或漏加,应按照试剂瓶标签正确添加无水乙醇;

    6)洗脱不充分:使用柱式试剂盒对 DNA 产物洗脱的时候,预热洗脱液并滴加在膜中央位置,尽可能的覆盖整个吸附膜,增加洗脱体积或者二次洗脱也可增加产量。

    Q7:Buffer RCL出现浑浊还能使用吗?
    A7:

    不能。

    Q8:Buffer GL出现沉淀怎么办?
    A8:

    Buffer GL出现沉淀,请将Buffer GL56℃水浴至重新溶解。

    Q9:提取gDNA的同时可以提取到cfDNA吗?
    A9:

    可以提,但由于cfDNA本身含量较少,且红细胞裂解后释放的核酸酶会降解cfDNA。建议使用专门的试剂盒进行提取。

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